پاورپوینت تعریف PCR (pptx) 29 اسلاید
دسته بندی : پاورپوینت
نوع فایل : PowerPoint (.pptx) ( قابل ویرایش و آماده پرینت )
تعداد اسلاید: 29 اسلاید
قسمتی از متن PowerPoint (.pptx) :
بنام خدا
1
تعریف PCR :
(دستگاه کپی DNA)با استفاده از اجزای همانند سازی طبیعی DNA ، در داخل لوله آزمایش، DNA را تکثیر مینماید.
اجزاء PCR :
2
توالی نوکلئوتیدی نمونه
dNTP
آنزیم
بافر
کاتیون
پرایمر
آب
تعریف پرایمر از دیدگاه بیوشیمی
پرایمر قطعه رشته ای مکمل با قالب یک گروه -3′هیدروکسیل آزاد می باشد که یک نوکلئوتید می تواند به آن اضافه گردد.انتهای 3′ پرایمر را انتهای پرایمری گویند. به عبارتی دیگر لازم است قسمتی از زنجیر جدید از ابتدا در محل باشد.
تمامی DNAپلیمرازها تنها می توانند نوکلئوتیدها را به رشته ای اضافه نمایند که از قبل موجود است.
پرایمرها اغلب الیگونوکلئوتیدهای RNA و نه DNA هستند که در محل و زمان مورد نیاز توسط آنزیم های اختصاصی سنتز می شوند.
3
تفاوتهای پرایمر مورد استفاده در PCR
پرایمرها در واکنش زنجیره ای پلیمراز در واقع رشته های کوچک اختصاصی از یک DNA تک رشته ای (ssDNA) هستند که الیگومر نیز نامیده می شوند.
این آغازگرها به سمت نقطه مکمل خود در DNA تک رشته ای شده رفته و به آن متصل می گردد.
4
پرایمر Forward پرایمر Reverse
5
اگر لوپ تشکیل می دهد یک نوکلئوتید می افزائیم.
6
ATG
ATTT
مطابق با توالی ثبت شده در NCBI
جایگاه برش آنزیم محدود کننده
کدون پایان
جایگاه برش آنزیم محدود کننده
مکمل توالی ثبت شده در NCBI
کدون آغاز
Forward Primer
Reverse Primer
دوازده نکته مهم در طراحی پرایمر
طول یک پرایمر وطول نهایی قطعه
تعیین دمای ذوب
میزان G+C
دمای اتصال آغازگر (Ta)
دمای اتصال آغازگر بهتر است بین 55-65 درجه سانتیگراد باشد.
حضور باز G و C برای افزایش میزان عملکرد
ساختمان ثانویه(ساختمان سنجاق سری،دایمر داخلی،کراس دیمر)
7
ساختمان سنجاق سری
8
9
